>> >>

透射电子显微镜测试样品须知

发布时间:2018/01/08 09:53:00    人气:

1、测试样品可为悬浮滴液和超薄切片。

2、粉末样品一般制备成一定浓度的悬浊液滴到微栅或支持膜铜网上。分散剂根据样品性质而定,一般为无水乙醇。

3、生物医学样品一般可采用负染技术和超薄切片技术制备。超薄切片一般为70nm左右。

4、超薄切片技术的操作流程为:取材—固定—脱水—渗透—包埋—聚合—超薄切片—染色

5、实验室备有微栅和碳支持膜铜网;实验结果采用刻录光盘的方式给出。

附件1:粉末样品的制备

取少量待观察的粉末颗粒,放入洁净的小烧杯或试管经超声波超声20min左右,充分分散使其成为悬浊液,滴1~2滴到微栅或支持膜铜网上,干燥即可。

附件2:透射电镜生物样品制备步骤

1.取材:组织块小于1立方毫米

2.固定:2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次


1%锇酸固定液固定 2-3小时

用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次

3.脱水:

50%乙醇 15-20分

70%乙醇 15-20分

90%乙醇 15-20分

90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分

90%丙酮 15-20分

以上在4度冰箱内进行

100%丙酮 室温 15-20分三次

4.包埋:

纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时

纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜

纯包埋液 37度 2-3小时

5.固化:

37度烘箱内 过夜

45度烘箱内 12小时

60度烘箱内 24小时

6.超薄切片机切片 70 nm

7.醋酸铀-柠檬酸铅双染色

附件3:负染色的操作方法

用一根细滴吸管吸一滴样品悬液滴在有膜的铜网上,滴样时要防止铜网被液体吸到管上来或翻转而被污染。如果用Formvar膜时,在制好膜后,可以直接在粘于滤纸上的铜网进行负染色操作。如果用碳时,要用镊子夹着铜网,滴液后静置数分钟,然后用滤纸从铜网边缘吸去多余的液体,滴上负染色液,染色1~2分钟用滤纸吸去负染色液,再用蒸馏水滴在铜网上洗1~2次,用滤纸吸去水,待干后可用于电镜观察。干燥时,由于表面张力的作用,某些敏感的材料可能受到损伤,可用戊二醛或四氧化锇预固定。预固定在滴样之后进行。

 

 
最新列表
热点推荐
河北科技师范学院秦皇岛校区  0335-8387040  邮编:066004
昌黎城关河北科技师范学院科研楼  0335-2039297  邮编:066600
邮箱:fxcszx838@126.com
中国·河北省·秦皇岛  河北科技师范学院   计算机系版权所有@2008


技术支持手机页        联系QQ:986616675      C# 20120416 版(160615)

请升级浏览器版本

你正在使用旧版本浏览器。请升级浏览器以获得更好的体验。